4-نيتروفينيل بيتا-دي-غالاكتوبيرانوزيد CAS:200422-18-0

التأثير: يُستخدم مركب ONPG كركيزة خاصة للكشف عن وجود ونشاط إنزيم بيتا-جالاكتوزيداز. عند وجود إنزيم بيتا-جالاكتوزيداز ونشاطه، يقوم بتحليل ONPG إلى منتجين: أورثو-نيتروفينول ومشتق من الجالاكتوز. ينتج عن تحرر أورثو-نيتروفينول تغير في اللون إلى الأصفر، ويمكن قياس هذا التغير باستخدام مطياف ضوئي.

التطبيق: يتمتع ONPG بالعديد من التطبيقات في أبحاث البيولوجيا الجزيئية والكيمياء الحيوية:

تحديد نشاط إنزيم بيتا-جالاكتوزيداز: يُستخدم مركب ONPG عادةً لقياس وتحديد كمية نشاط إنزيم بيتا-جالاكتوزيداز. ويمكن قياس معدل تكوين مركب أورثو-نيتروفينول، الذي يتناسب طرديًا مع نشاط الإنزيم، باستخدام مطياف ضوئي.

التعبير الجيني وتنظيمه: يُستخدم ONPG بكثرة في التجارب المتعلقة بدراسات التعبير الجيني وتنظيمه. ويُستخدم بشكل متكرر في فحوص البروتينات المدمجة، مثل نظام lacZ المدمج الشائع الاستخدام، لدراسة التعبير الجيني الخاضع لسيطرة محفزات محددة. يوفر قياس نشاط بيتا-جالاكتوزيداز باستخدام ONPG معلومات قيّمة حول مستوى التعبير الجيني.

فحص نشاط بيتا-جالاكتوزيداز: يمكن استخدام ONPG كطريقة فحص لونية في تقنية الحمض النووي المؤتلف لتحديد وجود ووظيفة جين LacZ، الذي يرمز إلى بيتا-جالاكتوزيداز. تساعد هذه الطريقة في تحديد المستنسخات التي تحتوي على الجين المطلوب.

دراسات حركية الإنزيم: يُعدّ ONPG مفيدًا أيضًا في دراسة حركية إنزيم بيتا-جالاكتوزيداز. فمن خلال قياس معدل تفاعل الإنزيم مع الركيزة عند تراكيز مختلفة للركيزة، يُمكن تحديد المعاملات الحركية مثل ثوابت ميكايليس-مينتين (Km) ومعدلات التفاعل القصوى (Vmax).