4-نيتروفينيل بيتا-د-غالاكتوبرانوسيد CAS:200422-18-0

التأثير: ONPG عبارة عن ركيزة تستخدم خصيصًا للكشف عن وجود ونشاط إنزيم β-galactosidase.عندما يكون إنزيم β-galactosidase موجودًا ونشطًا، فإنه يقسم ONPG إلى منتجين: o-nitrophenol ومشتق الجالاكتوز.يؤدي تحرير النيتروفينول إلى تغير اللون الأصفر، والذي يمكن قياسه باستخدام مقياس الطيف الضوئي.

التطبيق: لدى ONPG العديد من التطبيقات في أبحاث البيولوجيا الجزيئية والكيمياء الحيوية:

تحديد نشاط β-galactosidase: يستخدم ONPG بشكل شائع لقياس وقياس نشاط إنزيم β-galactosidase.يمكن قياس معدل تكوين النيتروفينول، والذي يتناسب طرديًا مع نشاط الإنزيم، باستخدام القياس الطيفي.

التعبير الجيني وتنظيمه: غالبًا ما يستخدم ONPG في التجارب المتعلقة بدراسات التعبير الجيني والتنظيم.يتم استخدامه بشكل متكرر في فحوصات بروتين الاندماج، مثل نظام دمج lacZ الشائع الاستخدام، لدراسة التعبير عن الجينات الخاضعة لسيطرة مروجين محددين.يوفر نشاط بيتا جالاكتوزيداز المقاس باستخدام ONPG نظرة ثاقبة لمستوى التعبير الجيني.

فحص نشاط β-galactosidase: يمكن استخدام ONPG كطريقة فحص لونية في تقنية الحمض النووي المؤتلف لتحديد وجود ووظيفة جين LacZ، الذي يشفر β-galactosidase.تساعد طريقة الفحص هذه في تحديد الحيوانات المستنسخة التي تحتوي على الجين محل الاهتمام.

دراسات حركية الإنزيم: يعتبر ONPG مفيدًا أيضًا في دراسة حركية إنزيم β-galactosidase.من خلال قياس معدل تفاعل الإنزيم مع الركيزة عند تركيزات مختلفة من الركيزة، من الممكن تحديد المعلمات الحركية مثل ثوابت ميكايليس-مينتن (Km) ومعدلات التفاعل القصوى (Vmax).