كيفية تحديد التركيز الأمثل؟
بالنسبة للمحفز IPTG (الأيزوبروبيل-بيتا-د-ثيوجالاكتوسيدي)، كلما زاد التركيز، كان ذلك أفضل.يعتمد التركيز الأمثل على الظروف التجريبية المحددة والتأثير التعريفي المطلوب.
بشكل عام، يتم استخدام تركيز IPTG في نطاق 0.1-1 مم.التركيزات المنخفضة يمكن أن تقلل من الآثار الضارة على نمو الخلايا ويمكن أن تقلل من السمية الخلوية بسبب الإفراط في التعبير عن البروتينات المستهدفة.قد تسبب التركيزات الأعلى عبءًا استقلابيًا مفرطًا للخلية، مما يؤثر على نمو الخلايا وكفاءة التعبير.
يمكن أن تكون طريقة تحديد التركيز الأمثل هي تقييم مستوى التعبير عن البروتين المستهدف عن طريق إجراء اختبارات تحريض IPTG بتركيزات مختلفة.يمكن إجراء اختبارات الثقافة على نطاق صغير باستخدام مجموعة من تركيزات IPTG (على سبيل المثال 0.1 ملم، 0.5 ملم، 1 ملم، وما إلى ذلك) ويمكن تقييم تأثير التعبير بتركيزات مختلفة عن طريق الكشف عن مستوى التعبير للبروتين المستهدف (على سبيل المثال الغربي كشف لطخة أو مضان).وفقا للنتائج التجريبية، تم اختيار التركيز ذو أفضل تأثير التعبير باعتباره التركيز الأمثل.
بالإضافة إلى ذلك، يمكنك أيضًا الرجوع إلى الأدبيات ذات الصلة أو تجربة المختبرات الأخرى لفهم نطاق تركيز IPTG الشائع الاستخدام في ظل ظروف تجريبية مماثلة، ثم تحسينه وضبطه وفقًا للاحتياجات التجريبية.
من المهم ملاحظة أن التركيز الأمثل قد يختلف تبعاً لأنظمة التعبير المختلفة والبروتينات المستهدفة والظروف التجريبية، لذلك من الأفضل تحسين كل حالة على حدة.
وقت النشر: 28 سبتمبر 2023